برای توزین پودر با قرار دادن یک تکه کاغذ بر روی ترازو وکالیبره کردن (صفر کردن ) آن به آرامی با یک قاشقک تمیز و خشک پودر را روی کاغذ ریخته و وزن آن را می سنجیم .

در مرحله بعد آب مقطر را در یک مزور (که دقیق ترین وسیله اندازه گیری حجم مایعات است ) می ریزیم . سپس قبل از اینکه پودر را در ارلن بریزیم مقداری از آب مقطر را در آن می ریزیم تا پودر به ته ارلن نچسبد و در هنگام حرارت دادن نسوزد. همزمان با تکان دادن ارلن مابقی آب مقطر را نیز می افزاییم . باید توجه کنیم که اگر پودر به صورت توده درآمده است ابتدا آن را با قاشقک له کنیم و سپس در ارلن بریزیم . همچنین برای اینکه در هنگام هم زدن محیط کشت از ارلن بیرون نریزد باید حجم ارلن حداقل دوبرابرحجم محیط کشت مورد نظر ما باشد.

پس از هم زدن اولیه محیط کشت در ارلن با قرار دادن یک توری شعله پخش کن بر روی شعله به آرامی آن را حرارت می دهیم . حرارت دادن را تا زمانی ادامه می دهیم که محیط بجوشد . باید دقت شود محیط کشت در حین حرارت دادن کف نکند و سرریز نشود. بدین منظور وقتی که محیط به جوش آمد آن را از روی شعله برداشته و حداکثر به مدت یک دقیقه کمی بالاتر از شعله آن را هم می زنیم.

اگر هدف ما تهیه محیط کشت مایع باشد حرارت دادن لازم نیست و در این مرحله آن را در لوله آزمایش های استریل توزیع نموده و درپوش یا پنبه بر روی آن قرار می دهیم . سپس لوله ها را در جا لوله ای مخصوص چیده و برای جلوگیری از پریدن پنبه ها سر آنها را بایک کاغذ می پوشانیم و سپس در اتوکلاو قرار می دهیم . لوله ها باید ازنظر ارتفاع برابر باشند اما قطر آنها می تواند متفاوت باشد.

اگر حجم محیط کشت مایع در هر لوله ثابت باشد برای ریختن محیط کشت در آنها می توانیم از پیپت و یا وسیله ای به نام پیپتور استفاده کنیم . پیپتور دارای یک مخزن است که محیط کشت را در آن می ریزیم و یک لوله مدرج دارد که می توانیم حجم مایع خروجی در هر بار فشار دادن شاسی آنرا تنظیم نماییم .

در صورتی که هدف تهیه محیط کشت جامد باشد بسته به توصیه کارخانه سازنده می توانیم از اتوکلاو استفاده کرده و یا از این کار صرف نظر کنیم . برای مثال محیط کشت s-s آگار که یک محیط کشت اختصاصی است نباید اتوکلاو شود. محیط کشت هایی که باید اتوکلاو شوند پس از حرارت دادن در ارلن دهانه ارلن را با پنبه پوشانده و پنبه را با فویل آلومینیومی محکم می کنیم .

اگر حجم زیادی از محیط کشت تهیه می کنیم بهتر است از چند ارلن کوچک به جای یک ارلن بسیار بزرگ استفاده کنیم . این عمل باعث سهولت کار تهیه محیط کشت و تقسیم آن در پتری دیش می شود .

بعد از اتوکلاو کردن محیط کشت باید تا دمای 50 درجه سلسیوس سرد شود تا بتوانیم آنرا در پتری دیش بریزیم . بهترین کار این است که برای حفظ این دما ازحمام بن ماری 50 درجه استفاده کنیم .

برای اطمینان از استریل بودن محیط کشت بعد از اتوکلاو کردن می توان در یک پتری دیش خالی مقداری از محیط کشت را به تنهایی انکوبه کرد.(به مدت 24 ساعت )

قبل از هر کار لازم است هود را با الکل ضد عفونی کنیم .

در صورتیکه ارگانیسم خاصی کشت دهیم که نیاز به دوره انکوباسیون طولانی تر دارد می توان میزان محیط کشت بیشتری در پتری دیش ریخت .

بعد از ریختن محیط کشت در پتری دیش ها درب آنها را گذاشته و بعد از اینکه محیط خودش را گرفت می توان آنها را وارونه کرد که دلیل آن به علت تشکیل بخارهای آب تشکیل شده در درب پتری دیش است که باعث آلودگی محیط کشت نشود و قطرات موجود در درب پتری دیش از منافذ بین درب پتری دیش خارج شود.